1. Použijte online filtry
Vložený filtr je umístěn mezi automatickým podavačem vzorků a chromatografickou kolonou (nebo ochrannou kolonou). Běžné in-line filtry jsou rozděleny na nerezové in-line filtry s vyměnitelnou fritou (0,5 μm nebo 0,2 μm) a jednorázové PEEK. U on-line filtrů vyrobených z různých materiálů musí být obecně vybrána sítová deska s menším otvorem než deska frity kolony, aby se účinně zachytily částice, které mohou blokovat chromatografickou desku frity kolony. Jakmile se zjistí, že tlak přístroje se začíná zvyšovat, je možné, že se in-line filtr začíná ucpávat a musíme jej aktualizovat, než se zcela ucpe.
In-line filtry fungují stejně jako membrány, ale nevyžadují žádnou další práci. Po odstředění vzorku je stále možné, že do přístroje vstoupí malé množství částic a zbytkové částice mohou být zachyceny in-line filtrem umístěným před chromatografickou kolonou. Výhodou online filtru je navíc to, že je jednoduchý a snadno vyměnitelný. Obecně platí, že výměna trvá pouze 5 minut a může být restartována pro použití a nemusí trávit čas přenastavováním nebo kalibrací. Další výhodou je, že in-line filtr může také odfiltrovat částice generované stárnutím opotřebení některých částí přístroje. Důrazně se zasazuji o to, aby každý přístroj s kapalnou fází byl vybaven in-line filtrem. I když je použit ochranný sloup, doporučuji také instalovat in-line filtr před ochranný sloup.
2. Použijte ochranný sloup
Ochranný sloup je krátká chromatografická kolona instalovaná před chromatografickou kolonou. Obvykle je 1-2 cm dlouhá a obal je sladěn s obalem použité kolony a velikost pórů použité frity není větší než velikost frity použité ve sloupci. Ochranný sloupek má dvě funkce: (1) může blokovat částice, které mohou blokovat kolonu; (2) protože se shoduje ochranná kolona a náplň kolony, všechny chemické nečistoty, které mohou nevratně interagovat s náplní kolony bez špičky, budou zachyceny nejprve strážní kolonou.
Použití ochranného sloupku může určitě prodloužit životnost sloupu. Před zvážením, zda použít strážní kolonu, se však doporučuje vyhodnotit následující body:
(1) Strážní sloup není levný, proto zvažte, zda náklady na nákup ochranného sloupku mohou být kompenzovány zvýšenou životností sloupu;
(2) Jak dlouhá je životnost strážní kolony? Je třeba věnovat pozornost tomu, kdy je třeba vyměnit ochrannou patronu, aby nedošlo ke kontaminaci chromatografické kolony, protože výměna je příliš pozdě;
(3) Jak vypláchnout strážní sloup? Při proplachování je třeba ochrannou kolonu a chromatografickou kolonu promýt odděleně, aby se zabránilo propláchnutí nečistot nahromaděných v ochranné koloně do chromatografické kolony;
(4) Neočekávejte zvýšení účinnosti kolony v důsledku přidání ochranné kolony o délce 1-2 cm. Přestože instalace ochranného sloupku je podobná zvětšení délky sloupu, použití ochranného sloupku také přidává dva konektory a spojovací trubky, což sníží účinnost sloupu přístrojového systému, takže by bylo dobré, kdyby mohla být zachována účinnost sloupu bez ochranného sloupku.
Netřeba dodávat, že použití strážních sloupů může jistě prodloužit životnost sloupu, ale doporučuje se, aby každá laboratoř vyhodnotila potřebu strážních sloupů z hlediska ekonomiky a úsilí. I se strážní kolonou bych doporučil umístit in-line filtr mezi strážní sloupek a automatický podavač vzorků, koneckonců výměna in-line filtru je levnější než výměna ochranného sloupku a zvyšuje životnost ochranné kolony i kolony.
3. Nevkládejte neošetřené vzorky
S předúpravou nebo bez ní se doporučuje, aby všechny vzorky byly před injekcí filtrovány nebo odstředěny. Pokud je například vzorek filtrován přes filtrační membránu, aby se odstranily částice, a tím se snížilo ucpání frity chromatografické kolony, musí být velikost pórů filtrační membrány menší než velikost pórů frity chromatografické kolony. Obecně platí, že chromatografické kolony s částicemi většími než 3 μm používají fritu 2 μm, chromatografické kolony s částicemi 3 μm používají fritu 0,5 μm a kolony s částicemi menšími než 3 μm obecně používají fritu 0,2 μm, takže obecné filtry 0,45 μm lze v zásadě použít ve všech chromatografických kolonách s výjimkou částic sub-2 μm; pro kolony s částicemi sub-2 μm se obecně používají filtry s póry 0,2 μm. Většina filtračních membrán je předem zabalena a může být přímo připojena k injekční stříkačce pro filtraci nebo použita jako filtrační deska v 96jamkové desce.